漸漸習慣了現(xiàn)代生活的美國隊長史蒂夫·羅杰斯(克里斯·埃文斯 Chris Evans 飾)，在一次行動后隱隱嗅到神盾局內(nèi)部所彌漫出來的兇險氣味。而當?shù)弥穸芫终孛苓M行的“洞察計劃”后，他更為此感到憤怒。某天，神盾局指揮官尼克-法瑞(塞繆爾·杰克遜 Samuel L. Jackson 飾)遭到一群武裝分子襲擊，他拼盡全力將一支U盤交到美國隊長手中，這里面藏著該局二戰(zhàn)以來最重要且最可怕的秘密。在此之后，美國隊長因涉嫌殺害尼克而遭到前局長亞歷山大·皮爾斯(羅伯特·雷德福/Robert Redford 飾)的通緝和追殺，逃亡中他得到黑寡婦(斯嘉麗·約翰遜 Scarlett Johansson 飾)和退伍老兵“獵鷹”(安東尼·麥凱 Anthony Mackie 飾)的幫助。